Edman测序法是一种用于多肽中氨基酸序列测定的化学方法。该方法由Pehr-Edman于1960年开发。该测序法通过化学反应依次切下蛋白N端的每一个氨基酸，再使用高效液相色谱法分别鉴定氨基酸的ID，多次鉴定出的序列信息即为最终的蛋白质序列。

Edman测序流程

l 假设我们的氨基酸序列是MYKMRYY；

l 用异硫*酸盐对氨基末端进行标记；

l 水解样本，将被标记的氨基酸分离出来；

l 使用高效液相色谱法（HPLC）鉴定被标记的氨基酸；

l 然后再次标记剩余多肽链中的N端；

l 重复以上循环，直到最后一个氨基酸。

百泰派克蛋白质N端测序图示流程如下：

Edman测序的优势

l 不需要对照已有蛋白质序列库，就能100%保证确定蛋白质序列；

l 对于发生N端突变或者经改造过的蛋白，仍然可以提供直接的序列测定，且更为准确。

Edman测序的局限性

l 通量较低，无法对多个蛋白质进行同时分析；

l 分析过程相对耗时，每个残基测试大概需要45分钟，且残基测序成本高；

l 由于此测序法需要从蛋白质N端开始，对于N端封闭的蛋白质则无法使用该法进行测序；

l 蛋白质样品量需求较大；

l 一般仅对N端氨基酸序列在50个左右的蛋白样品进行检测时，精准度才高，超过数量，准确率和效率都会降低。

针对Edman测序的局限性的解决方法

l 针对通量低的问题，我们可以结合质谱鉴定和Edman测序二者的优缺点，取长补短，实现高通量的蛋白鉴定和序列测定。

l 针对N端封闭的蛋白质，我们可以根据具体情况，选择相应的酶来去除蛋白N端的修饰，或者使用质谱鉴定法来鉴定N端的修饰。

Edman测序的应用领域

l 可用于蛋白表达产物的验证。验证重组蛋白插入位点和表达顺序是否正确。

l 可用于验证细胞株建立和发酵过程中的蛋白产物。验证细胞株建立和发酵过程中蛋白产物N端甲硫氨酸和信号肽是否正确处理。

l 可用于分析蛋白降解/酶切。对降解/酶切形成的新蛋白片段N端进行分析，确定断裂/酶切位点。

l 可用于De-novo测序。能够对蛋白数据库中不存在的全新蛋白序列进行分析。