N末端蛋白测序是一种用于确定蛋白质分子氨基酸序列起始端（N-末端）的方法。这一技术通过分析蛋白质链上游的氨基酸序列，揭示蛋白质的结构和功能特性，为深入理解蛋白质的生物学功能、翻译后修饰、加工过程以及结构域特征提供信息。N末端蛋白测序在蛋白质组学、药物研发、生物医学研究等领域具有广泛应用，尤其在蛋白质结构解析、抗体药物开发以及新蛋白质鉴定等方面发挥着关键作用。在蛋白质翻译过程中，N-末端是蛋白质链的起始端，通常含有一些特征性序列，如信号肽、翻译起始密码子所决定的氨基酸残基等。这些信息对于揭示蛋白质的翻译起始位点、加工剪切过程以及成熟蛋白质的结构和功能具有重要意义。N末端蛋白测序不仅可以帮助确认蛋白质的表达正确性，还可以用于鉴定蛋白质加工过程中的异常，识别蛋白质降解途径，甚至帮助揭示蛋白质与其相互作用分子的结合特性。N末端蛋白测序最经典的方法是Edman降解法，该方法由瑞典科学家Pehr Edman于1950年提出并在蛋白质组学领域得到广泛应用。Edman降解法通过化学试剂（异硫氰酸苯酯，PITC）与蛋白质的N末端氨基酸残基反应形成一种可裂解的衍生物，随后通过酸性条件将衍生物从多肽链上选择性地切割下来得到一种稳定的PTH-氨基酸（苯硫脲氨基酸）衍生物。这种PTH-氨基酸可以通过高效液相色谱（HPLC）进行分离和鉴定，从而确定N末端的第一个氨基酸残基。通过循环进行这一过程，可以依次解析N末端多个氨基酸残基，最终获得一段准确的N末端序列。

一、N末端蛋白测序的步骤

1、样本制备：纯化蛋白质，确保样本无污染和降解，去除影响测序的杂质。

2、化学修饰：使用异硫氰酸苯酯（PITC）与蛋白质N末端氨基酸反应。

3、选择性裂解：在酸性条件下，将N末端氨基酸切割下来，生成PTH-氨基酸衍生物。

4、分离与鉴定：使用高效液相色谱（HPLC）对PTH-氨基酸进行分离，鉴定每个循环得到的氨基酸种类。

5、序列解析：将每一轮循环得到的氨基酸进行排列，确定N末端序列。

二、N末端蛋白测序的优势

1、高特异性：可以精确识别蛋白质N-末端的氨基酸序列。

2、准确性高：化学反应过程稳定，结果可重复性强。

3、序列信息丰富：能够解析多达10-30个N末端氨基酸残基。

4、无偏好性：可应用于不同类型的蛋白质和多肽样本。

5、验证翻译起始位点：帮助验证蛋白质的起始位点及加工后的完整性。

百泰派克生物科技能够为科研机构、生物制药企业提供高质量的蛋白质N/C端测序服务。我们的技术平台结合Edman降解法与质谱技术，能够高效、精准地解析蛋白质N-末端序列，确保数据的准确性和可靠性。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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