在细胞转染实验中,血清的使用一直是一个备受争议的话题。那么,血清究竟对细胞转染有何影响?实验时到底该不该加血清?今天我们就来深入探讨这个问题。
血清是细胞培养基中的重要成分,含有蛋白质、生长因子、激素等,能够支持细胞生长和存活。然而,在转染过程中,血清的作用却较为复杂:
一 降低转染效率
血清中的蛋白质(尤其是带负电的蛋白质)可能干扰阳离子脂质体等转染试剂与核酸的结合,影响复合物的形成,从而降低转染效率。
对于传统的脂质体转染试剂(如Lipofectamine2000),血清的存在可能导致转染复合物不稳定,甚至引发细胞毒性。
二 增加细胞存活率
血清能提供营养因子,帮助细胞在转染过程中维持健康状态,减少因转染引起的细胞应激和死亡。
对于某些敏感细胞(如原代细胞或干细胞),无血清条件可能导致细胞状态恶化,影响实验结果。
那么细胞转染到底需不需要血清?
答案是:取决于细胞转染的阶段和细胞类型。
转染阶段
1.复合物形成阶段
需要无血清条件:在DNA脂质体复合物形成阶段必须使用无血清培养基(如Opti MEM),否则血清中的蛋白会干扰复合物形成,血清中的核酸酶(如DNase、RNase)可能降解未完全保护的核酸,也会影响复合物的形成。
2.转染阶段
允许含血清转染:目前市面上的转染试剂,普遍能在血清存在下不受干扰递送核酸,因此无需在转染过程中去除血清,建议转染时使用含血清培养基,尤其是比较脆弱的细胞类型。
细胞类型
不同细胞类型反应不同,例如,HeLa、293T等细胞在无血清条件下转染效率较高,而某些原代细胞或难转染细胞可能需要血清来维持活性。对于原代细胞、干细胞,建议选择兼容血清的转染试剂。不同的实验条件和操作对于转染效果也有影响。因此,对于新细胞系,建议测试含血清vs.无血清条件下的转染效率,选择最佳方案。
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